懸浮透析管處理及透析操作

　　懸浮透析管處理及透析操作
　　透析只需要使用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀，將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi)，將此透析袋浸入水或緩沖液中，樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內(nèi)，而鹽和小分子物質(zhì)不斷擴(kuò)散透析到袋外，直到袋內(nèi)外兩邊的濃度達(dá)到平衡為止。保留在透析袋內(nèi)未透析出的樣品溶液稱為"保留液"，袋（膜）外的溶液稱為"滲出液"或"透析液"。透析的動(dòng)力是擴(kuò)散壓，擴(kuò)散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度，正比于欲透析的小分子溶質(zhì)在膜內(nèi)外兩邊的濃度梯度，還正比于膜的面積和溫度，通常是4℃透析，升高溫度可加快透析速度。
　　透析膜可用動(dòng)物膜和玻璃紙等，但用的zui多的還是用纖維素制成的透析膜，目前常用的是美國(guó)Union Carbide（聯(lián)合碳化物公司）和美國(guó)光譜醫(yī)學(xué)公司生產(chǎn)的各種尺寸的透析管，截留分子量MwCO（即留在透析袋內(nèi)的生物大分子的zui小分子量，縮寫為MwCO）通常為1萬左右。商品透析袋制成管狀，其扁平寬度為23 mm～50 mm不等。為防干裂，出廠時(shí)都用10％的甘油處理過，并含有極微量的硫化物(0.1%)、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質(zhì)，它們對(duì)蛋白質(zhì)和其它生物活性物質(zhì)有害，用前必須除去。
　　透析袋的處理：可先用50％乙醇煮沸1小時(shí)，再依次用50％乙醇、0.01 mol/L碳酸氫鈉和0.001 mol/L EDTA溶液洗滌，zui后用蒸餾水沖洗即可使用。實(shí)驗(yàn)證明，50％乙醇處理對(duì)除去具有紫外吸收的雜質(zhì)特別有效。（也可先在大體積的2%(W/V)碳酸氫鈉和1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將透析袋煮沸10分鐘，用蒸餾水*清洗后，再放在1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將之煮沸10分鐘。）使用后的透析袋洗凈后可存于4℃蒸餾水中，確保透析袋始終浸沒在溶液內(nèi)。若長(zhǎng)時(shí)間不用，可加少量NaN2，以防長(zhǎng)菌。從此時(shí)起取用透析袋必須戴手套。洗凈涼干的透析袋彎折時(shí)易裂口，用時(shí)必須仔細(xì)檢查，不漏時(shí)方可重復(fù)使用。新透析袋如不作如上的特殊處理，則可用沸水煮五至十分鐘，再用蒸餾水洗凈，即可使用。使用時(shí)，一端用橡皮筋或線繩扎緊，也可以使用特制的透析袋夾夾緊，由另一端灌滿水，用手指稍加壓，檢查不漏，方可裝入待透析液，通常要留三分之一至一半的空間，以防透析過程中，透析的小分子量較大時(shí)，袋外的水和緩沖液過量進(jìn)入袋內(nèi)將袋漲破。含鹽量很高的蛋白質(zhì)溶液透析過夜時(shí)，體積增加50％是正常的。為了加快透析速度，除多次更換透析液外，還可使用磁子攪拌。透析的容器要大一些，可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。小量體積溶液的透析，可在袋內(nèi)放一截兩頭燒園的玻璃棒或兩端封口的玻璃管，以使透析袋沉入液面以下。